Die E3-Ligase MARCH9: experimentelle Untersuchung eines Sarkoidose-Risikogens - Splicevarianten, Expressionsmuster, Stimulationsreaktionen und funktionelle Rolle

Abstract: Basierend auf der genomweiten Assoziationsstudie zu sarkoidoserelevanten Genen wird in dieser Arbeit der Einfluss der E3 Ligase MARCH9 auf die Funktion von T-Zellen und akzessorischen Zellen untersucht.
Methoden: MARCH9 wurde am Modell von Jurkat und U937- Zellen untersucht, unter Anwendung von qPCR, Sequenzierungen, Westernblot, Fluoreszenzanalysen und CRISPR/Cas9 genome editing.
Ergebnisse / Diskussion: Die Hypothese eines bestehenden Zusammenhangs zwischen MARCH9 und Sarkoidose wurde durch signifikant höhere MARCH9-Werte bei Sarkoidosepatienten im Vergleich zu nicht Erkrankten unterstützt. Die Splicevarianten des Gens konnten durch die Etablierung spezifischer Primerpaare seperat untersucht werden. Insgesamt zeigte sich eine sehr niedrige MARCH9- Grundexpression auch in Jurkat-Zellen, von welcher nur ein geringer Teil der aktiven Variante 1 zuzurechnen ist. Stimulationen bewirkten einheitlich eine Erhöhung der MARCH9-Expression. Hierbei verhielten sich Variante 1 und 2 direkt proportional zueinander.Die Sequenzierung der MARCH9-qPCR-Produkte zeigte das bisher nicht beschriebene MARCH9 3.5, eine Variante, in der das Intron zwischen Exon 3 und 4 nicht herausgespleißt wurde. Ein Erfolg der an MARCH9 durchgeführten CRISPR/Cas9-Transfektion ist in Zusammenschau der Ergebnisse bei Klon J1 am wahrscheinlichsten. Dieser kann auch wegen seiner geringen MARCH9-Gesamtexpression für weiter Betrachtungen der Funktion dieser E3-Ligase verwendet werden

Standort
Deutsche Nationalbibliothek Frankfurt am Main
Umfang
Online-Ressource
Sprache
Deutsch
Anmerkungen
Universität Freiburg, Dissertation, 2023

Schlagwort
Sarkoidose
Genexpression
Sarkoidose
CRISPR/Cas-Methode
JURKAT-Zelle
Real time quantitative PCR
RNS-Spleißen

Ereignis
Veröffentlichung
(wo)
Freiburg
(wer)
Universität
(wann)
2023
Urheber

DOI
10.6094/UNIFR/233291
URN
urn:nbn:de:bsz:25-freidok-2332918
Rechteinformation
Open Access; Der Zugriff auf das Objekt ist unbeschränkt möglich.
Letzte Aktualisierung
25.03.2025, 13:52 MEZ

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Entstanden

  • 2023

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