Quantifying the heterogeneity of macromolecular machines by mass photometry

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Abstract: Sample purity is central to in vitro studies of protein function and regulation, and to the efficiency and success of structural studies using techniques such as x-ray crystallography and cryo-electron microscopy (cryo-EM). Here, we show that mass photometry (MP) can accurately characterize the heterogeneity of a sample using minimal material with high resolution within a matter of minutes. To benchmark our approach, we use negative stain electron microscopy (nsEM), a popular method for EM sample screening. We include typical workflows developed for structure determination that involve multi-step purification of a multi-subunit ubiquitin ligase and chemical cross-linking steps. When assessing the integrity and stability of large molecular complexes such as the proteasome, we detect and quantify assemblies invisible to nsEM. Our results illustrate the unique advantages of MP over current methods for rapid sample characterization, prioritization and workflow optimization

Location
Deutsche Nationalbibliothek Frankfurt am Main
Extent
Online-Ressource
Language
Englisch
Notes
Nature communications. - 11 (2020) , 1772, ISSN: 2041-1723

Event
Veröffentlichung
(where)
Freiburg
(who)
Universität
(when)
2020
Creator
Sonn-Segev, Adar
Belacic, Katarina
Bodrug, Tatyana
Young, Gavin
VanderLinden, Ryan T.
Schulman, Brenda A.
Schimpf, Johannes
Friedrich, Thorsten
Dip, Phat Vinh
Schwartz, Thomas
Bauer, Benedikt
Peters, Jan-Michael
Struwe, Weston B.
Benesch, Justin L. P.
Brown, Nicholas G.
Haselbach, David
Kukura, Philipp
Contributor
Institute of Biochemistry, Molecular Bioenergetics

DOI
10.1038/s41467-020-15642-w
URN
urn:nbn:de:bsz:25-freidok-1741366
Rights
Der Zugriff auf das Objekt ist unbeschränkt möglich.
Last update
14.08.2025, 10:44 AM CEST

Data provider

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Time of origin

  • 2020

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